所有其他條件保持不變，微生物數量越多，殺菌劑需要消滅所有微生物的時間越長。斯波爾丁說明了這種關系，當他采用相同的測試條件并證明需要30分鐘殺死10株萎縮芽孢桿菌（原枯草芽孢桿菌）孢子，但需要3小時才能殺死100,000株萎縮芽孢桿菌孢子。這加強了在消毒和滅菌之前對醫療器械進行嚴格清潔的需要。減少必須通過細致清潔滅活的微生物數量，增加了根據標簽使用殺菌劑時的安全范圍，并縮短了殺死整個微生物負荷所需的暴露時間。滅菌劑對微生物的可及性：

當評估影響殺菌劑功效的因素時，還必須考慮微生物的位置。必須拆卸具有多個部件的醫療器械，并且諸如具有裂縫，接頭和通道的內窺鏡之類的設備比平面設備更難以消毒，因為設備的所有部件的消毒劑的滲透更加困難。只有直接接觸殺菌劑的表面才會被消毒，因此必須沒有氣穴，并且設備必須在整個暴露期間完全浸沒。應鼓勵制造商生產易于清潔和消毒的滅菌器。