高壓滅菌器是用于消毒的各種類型的媒體，通過在壓力下的干飽和蒸汽的手段加熱室。為了獲得干燥的飽和蒸汽，必須從高壓滅菌器內的材料和高壓滅菌器腔室本身中除去空氣。  這可以通過多種方式來實現。

為了從質量大但表面積小的物品（例如瓶裝介質）中去除空氣，需要的去除空氣zui少，并且自動空氣吹掃就足夠了，例如臺式高壓滅菌器。在這種情況下，當蒸汽從一體式源（向上排量）或從外部供應源（向下排量）進入時，允許空氣排出腔室。僅當從腔室中除去所有空氣后，通風孔才會關閉。進一步推廣這種方法是“自由蒸煮”，在這種情況下，允許通風口保持打開狀態一段設定的時間。然后，湍流蒸汽通過排氣孔，迫使殘留的空氣排出高壓滅菌器。對于包括許多氣袋（例如，包裹的儀器或織物）的更困難的負載，需要更主動的排氣方法。

去除空氣zui活躍的方法是通過真空系統。使用真空系統時，在引入任何蒸汽之前以及在進行自由蒸汽或真空脈沖之前，應先將腔室排空。從腔室和介質中除去空氣后，容器內的溫度將隨壓力升高，直至達到預設溫度。蒸汽加壓到至少1.1 Bar G時，滅菌溫度達到249.8F。由于壓力大于0.5 Bar G，高壓滅菌器被歸類為壓力容器，必須設計并通過ASME標準的認證，例如實驗室方形高壓滅菌器。

有多種方法可以在高壓滅菌器室內達到溫度和蒸汽：

• 整體/外部蒸汽發生器：通過內部源（例如內置在高壓滅菌器柜中的整體蒸汽發生器或大型設備的外部蒸汽發生器）將蒸汽直接注入腔室。
• 現場蒸汽源：許多機構（研究實驗室，醫院，制藥公司）都將自己的蒸汽源通過管道輸送到實驗室，高壓滅菌器可以連接到蒸汽源。
• 箱內加熱器：在某些高壓滅菌器（大多數臺式設備）中，加熱器內置在箱體底部，在此處手動添加水。加熱器將水燒開直到產生蒸汽。

蒸汽發生器或直接蒸汽的主要優點在于，周期時間可以大大縮短，而即時蒸汽不需要等待室內的熱水。在室內裝有基本加熱器的情況下，必須手動補充水，一旦水沸騰就提供蒸汽。

當達到所需的溫度和循環時間時，蒸汽供應將停止，溫度和壓力將開始逐漸下降。如果系統中包含真空系統，則可以更快速地排空蒸汽，以在循環結束時產生干燥機zui終產品。

滅菌后，可以移走物品（培養基，玻璃器皿，包裹的儀器等）并在實驗室中安全可靠地使用；或丟棄廢物時，可以離開實驗室。